Иммуногистохимическое исследование (ИГХ) при раке молочной железы является неотъемлемой частью диагностики и лечения этого заболевания. Методика позволяет уточнить молекулярные характеристики опухоли, определить ее чувствительность к различным видам терапии и спрогнозировать дальнейшее течение болезни. Основное преимущество ИГХ заключается в том, что оно дает возможность выявить экспрессию белков, которые играют ключевую роль в патогенезе рака молочной железы, таких как рецепторы эстрогенов (ER), прогестерона (PR), рецепторы HER2/neu, а также белок Ki-67.

Цели проведения иммуногистохимического исследования

Цели ИГХ включают несколько ключевых аспектов:

1. Определение молекулярного подтипа опухоли
   Рак молочной железы разделяется на несколько подтипов на основе экспрессии определенных белков и генов:
   • Люминальный A: высокое содержание ER и PR, низкая экспрессия HER2 и Ki-67.
   • Люминальный B: высокий уровень ER и PR, возможная гиперэкспрессия HER2 и увеличенный Ki-67.
   • HER2-положительный: гиперэкспрессия HER2 без ER и PR.
   • Тройной негативный: отсутствие ER, PR и HER2.
2. Прогнозирование течения заболевания
   Выявление экспрессии белков, таких как Ki-67 (индекс пролиферации клеток), помогает оценить агрессивность опухоли и вероятность метастазирования.
3. Подбор терапии
   Результаты ИГХ используются для определения чувствительности опухоли к гормональной терапии, таргетным препаратам (например, трастузумабу при HER2-положительном раке) и химиотерапии.
4. Мониторинг изменений опухоли
   При рецидивах или прогрессии рака возможно проведение повторного ИГХ для выявления изменений молекулярного профиля опухоли, что может потребовать корректировки лечения.

Подготовка к проведению исследования

Для качественного проведения ИГХ необходимо выполнение нескольких этапов:

Забор биоматериала

Материалом для исследования служат биоптаты или ткани, полученные при хирургическом удалении опухоли. Важно, чтобы образец был забран и сохранен в условиях, предотвращающих деградацию белков.

1. Методы получения образца:
   • Тонкоигольная биопсия – минимально инвазивный способ, который позволяет получить клеточный материал.
   • Трепан-биопсия – получение столбиков ткани, что обеспечивает больший объем информации.
   • Хирургический материал – используется после операции по удалению опухоли.
2. Фиксация
   Биоматериал фиксируется в 10%-ном нейтральном формалине. Продолжительность фиксации должна составлять от 6 до 72 часов для предотвращения изменений структуры тканей.

Подготовка препарата

Подготовка препарата включает несколько последовательных шагов:

• Обработка ткани: дехидратация и заливка в парафин, что позволяет сохранить структуру клеток.
• Изготовление срезов: тканевые срезы толщиной 3–5 мкм размещают на предметных стеклах.
• Декальцинация: проводится для образцов с наличием кальцифицированных участков.
• Обезжиривание и репарация: восстанавливают антигенные свойства тканей перед применением антител.

Выбор антител

Для проведения ИГХ используют специфические антитела, которые взаимодействуют с определенными белками в клетках. Антитела могут быть:

• Моноклональными – обладают высокой специфичностью и чувствительностью.
• Поликлональными – менее специфичны, но позволяют выявить несколько эпитопов.

Проведение иммуногистохимического исследования

Процесс ИГХ включает следующие этапы:

Иммунизация и связывание

Подготовленные тканевые срезы инкубируют с первичными антителами, которые связываются с соответствующими антигенами (белками) в клетках.

Визуализация

Для выявления мест связывания антител используют вторичные антитела, меченные ферментами или флюоресцентными метками. В результате в местах скопления белков происходит окрашивание, видимое под микроскопом.

Анализ под микроскопом

Патологоанатом исследует препарат, оценивая интенсивность и распространенность окрашивания. Например:

• ER/PR: положительный результат определяется наличием окрашивания в ядрах клеток.
• HER2: мембранное окрашивание клеток, оцениваемое по шкале от 0 до 3+.
• Ki-67: оценка процента клеток с окрашенными ядрами, что отражает уровень пролиферативной активности.

Расшифровка результатов

Результаты ИГХ интерпретируются в контексте клинических данных и являются основой для принятия решений по лечению.

Рецепторы эстрогенов и прогестерона (ER и PR)

Результат считается положительным, если более 1% опухолевых клеток демонстрируют экспрессию рецепторов. Высокий уровень экспрессии ER и PR свидетельствует о чувствительности к гормональной терапии (например, тамоксифену или ингибиторам ароматазы).

HER2/neu

Оценка проводится по 4-балльной шкале:

• 0: отсутствие мембранного окрашивания.
• 1+: слабое или едва заметное окрашивание.
• 2+: умеренное неполное мембранное окрашивание (неоднозначный результат).
• 3+: сильное мембранное окрашивание более 10% клеток (положительный результат).
  При результатах 2+ требуется проведение FISH-теста (флуоресцентной гибридизации) для подтверждения гиперэкспрессии HER2.

Ki-67

Уровень Ki-67 измеряется в процентах окрашенных клеток. Пороговое значение зависит от клиники, но обычно уровень выше 20–30% указывает на высокую пролиферативную активность и агрессивный характер опухоли.

Роль ИГХ в комплексной диагностике

ИГХ дополняет другие методы исследования, включая молекулярное профилирование и генетические тесты. В совокупности с клиническими и радиологическими данными это позволяет определить оптимальную стратегию лечения.

Иммуногистохимия также используется для мониторинга ответа на терапию и выявления изменений молекулярного профиля опухоли со временем. Например, опухоли, которые изначально были ER-положительными, могут стать ER-отрицательными при прогрессии, что потребует изменения подхода к лечению.

ИГХ стала стандартом в онкологии, предоставляя уникальную возможность для персонализированного подхода к лечению рака молочной железы. Это подтверждает важность данного метода как для ранней диагностики, так и для долгосрочного контроля заболевания.